Primer dimer tạo tác thường xảy ra ởsố chu kỳ ngưỡng lớn (thường là > 35 chu kỳ), cao hơn số chu kỳ ngưỡng cho amplicon mong muốn. Độ mờ của mồi tăng lên rõ rệt khi DNA bộ gen dị hợp được thêm vào.
Bạn sẽ thấy mồi mờ trên gel DNA ở đâu?
Trong PCR điểm cuối không định lượng, primer dimer sẽ xuất hiện dưới dạng một vệt mờ ít nhiều trên gel agarose,bên dưới dải sản phẩm quan tâm.
Sơn lót được hình thành như thế nào?
Các đoạn mồi tạo thànhkhi hai đoạn mồi liên kết với nhau, thay vì với DNA khuôn mẫu, do các vùng bổ sung của đoạn mồi.
Làm thế nào để bạn phát hiện ra chất làm mờ lớp sơn lót?
Cách dễ nhất để kiểm tra chất làm mờ mồi làđể so sánh phản ứng của bạn với đối chứng tiêu cực của bạn (nước thay vì DNA hoặc RNA). Primer dimers vẫn sẽ hình thành trong kiểm soát âm. Một số bộ sơn lót có nhiều khả năng hình thành vết mờ hơn những bộ khác.
Tại sao kem lót lại xuất hiện?
Chủ yếu là các chất làm mờ mồi được nhìn thấydo nồng độ cao của mồi trong hỗn hợp phản ứng PCR. Hoặc nếu không có khuếch đại PCR và bạn có thể nhìn thấy trên gel agarose dimer mồi. Nếu có thể nhìn thấy sản phẩm PCR thì bạn có thể giảm nồng độ của nguyên tố và giữ nguyên các điều kiện khác.
