Trước hết, cả EcoR1 và Xba1 đều để lại khoảng nhô ra 5 'khi chúng tiêu hóa DNA (Nde1 cũng vậy). Trong cả hai trường hợp, đầu 3 'bị lõm xuống, đó là lý do tại sao polyermase có thể thêm bazơ. Thứ hai, tất cả các polymerase chỉ có thể thêm bazơ vào đầu 3 ', vì vậyKlenow sẽ thêm 4 bazơ vào đầu 3' rút ngắn của cả hai trang webđể tạo ra các đầu thẳng.
Các enzym giới hạn có để lại 5 phosphate không?
Vectơ và phần chèn được tiêu hóa bởi các enzym giới hạn chứa các sửa đổi đầu cuối cần thiết (5 'phosphate và 3' hydroxyl), trong khi các đoạn được tạo ra bởi Phản ứng Chuỗi Polymerase (PCR) có thể không.
Kết thúc cùn có thể được nối lại không?
Thắt đầu cùn
Thắt đầu cùn không liên quan đến việc ghép nối cơ bản của các đầu nhô ra, vì vậybất kỳ đầu cùn nào cũng có thể được nối với một đầu cùn khác. Kết thúc thẳng thừng có thể được tạo ra bởi các enzym hạn chế như SmaI và EcoRV.
Taq polymerase có tạo ra kết thúc cùn không?
Có … Taq Polymerase thêm A-Overhangs nếu bạn giữ bước mở rộng cuối cùng ở 72 dC trên PCR. Chủ yếu được sử dụng để nhân bản TA.
Tại sao lại sử dụng đoạn Klenow trong giải trình tự DNA?
Đoạn Klenow cực kỳ hữu ích cho các nhiệm vụ dựa trên nghiên cứu như: Tổng hợp DNA chuỗi kép từ các khuôn mẫu chuỗi đơn. Điền vào các đoạn DNA 3 'bị rút lại để làm cho 5' nhô ra bị cùn . Tiêu đi nhô ra 3 'nhô ra.
