Trypsinization là quá trình phân ly tế bào bằng cách sử dụng trypsin, một loại enzyme phân giải protein có tác dụng phân hủy protein, để phân ly các tế bào kết dính khỏi mạch mà chúng đang được nuôi cấy. Khi được thêm vào môi trường nuôi cấy tế bào, trypsin sẽ phá vỡ các protein cho phép tế bào bám vào mạch.
Tại sao chúng ta lại Trypsinize các tế bào?
Trypsinization thường được thực hiện đểcho phép các tế bào đi qua một bình chứa mới, quan sát để thử nghiệm hoặc giảm mức độ hợp lưu trong bình bằng cách loại bỏ một phần trăm các ô.
Trypsin hoạt động như thế nào để tách các tế bào?
Trypsin / EDTA là một phương pháp kết hợp để tách tế bào. Trypsincắt các protein kết dính trong tương tác giữa tế bào và chất nền tế bào bằng cách cắt axit amin của các protein kết dính đặc biệt ở lysine hoặc aginine trên đầu C nếu axit amin ngược dòngkhông phải là proline.
Làm thế nào để bạn có được các tế bào kết dính trypsinized?
Thủ tục
- Lấy môi trường ra khỏi bình nuôi cấy bằng cách hút và rửa đơn lớp bằng dung dịch muối không chứa Ca2+và Mg 2+để loại bỏ tất cả các dấu vết của huyết thanh. …
- Phân phối đủ dung dịch trypsin hoặc trypsin / EDTA vào (các) bình nuôi cấy để bao phủ hoàn toàn lớp tế bào đơn lớp và đặt trong tủ ấm 37 ° C trong ~ 2 phút.
Làm cách nào để tắt trypsin trong nuôi cấy tế bào?
Sau khi các ô xuất hiện tách rời, thêm 2 tậpcủa môi trường tăng trưởng hoàn chỉnh đã được làm ấm trước để vô hiệu hóatrypsin. Nhẹ nhàng phân tán môi trường bằng cách lướt qua bề mặt lớp tế bào nhiều lần để đảm bảo khôi phục >95% tế bào. Đối với môi trường nuôi cấy không có huyết thanh, chất ức chế trypsin trong đậu nành (Sản phẩm số