Sau khi các tế bào xuất hiện tách rời, hãy thêm 2 khối lượng môi trường tăng trưởng hoàn chỉnh đã được làm ấm trướcđể vô hiệu hóa trypsin. Nhẹ nhàng phân tán môi trường bằng cách lướt qua bề mặt lớp tế bào vài lần để đảm bảo khôi phục >95% tế bào.
Làm cách nào để ngừng hoạt động trypsin?
Quá trình tiêu hóa trypsin có thể bị dừng lại bằng cáchđóng bănghoặc bằng cách giảm độ pH của phản ứng xuống dưới pH 4 bằng cách thêm axit formic, axetic hoặc trifluoroacetic (trypsin sẽ hoạt động trở lại khi pH được nâng lên trên pH 4). Các mẫu đã tiêu hóa có thể được lưu trữ ở -20 ° C.
Điều gì trung hòa trypsin?
Chất đệmchứa các ion canxi và magiecũng sẽ làm chậm hoạt động của trypsin. Tuy nhiên, FBS là cách hiệu quả hơn để ức chế hoạt động của trypsin.
Huyết thanh có khử hoạt tính trypsin không?
Huyết thanh khử hoạt tính trypsin còn sót lạitừ quá trình tiêu hóa bằng enzym của thận và các enzym phân giải protein do tế bào tổng hợp sau đó. Các tế bào trypsin hóa mới có thể được phát triển thành các lớp đơn lớp trong điều kiện không có huyết thanh với điều kiện chúng được rửa nhiều lần để loại bỏ trypsin còn sót lại.
Cần bao nhiêu phương tiện để hủy kích hoạt trypsin?
Miễn là bạn đang sử dụngít nhất 1: 1 tỷ lệ 5-10% huyết thanhmôi trường chứa với trypsin của bạn thì sẽ có đủ ức chế, sau đó là ly tâm và trao đổi phương tiện với môi trường tươi.
