Khối lượng phân tử càng lớn thì cuộn dây càng dài và phân tử đi càng chậm. Vì vậy,điện di + SDSphân tách trên cơ sở trọng lượng phân tử, không phải trên cơ sở điện tích bản địa. Lưu ý quan trọng: Các protein có cùng độ dài thường không thể được phân tách bằng điện di trên gel + SDS.
Làm cách nào để tách các protein có cùng trọng lượng phân tử?
Ly tâm, điện di và sắc kýlà các kỹ thuật phổ biến nhất để tinh chế và phân tích protein. Quá trình ly tâm phân tách các protein dựa trên tốc độ lắng của chúng, điều này bị ảnh hưởng bởi khối lượng và hình dạng của chúng.
Kỹ thuật nào tách các protein trên cơ sở tích điện?
Protein có thể được phân tách dựa trên điện tích thực của chúng bằng phương pháp sắc ký trao đổi ion. Nếu một protein có điện tích dương thực ở pH 7, nó thường sẽ liên kết với một cột hạt có chứa nhóm cacboxylate, trong khi protein mang điện tích âm thì không (Hình 4.4).
Kỹ thuật nào sau đây phù hợp nhất để tách protein dựa trên trọng lượng phân tử?
Phương pháp sắc ký dựa trên sự phân vùng rất hiệu quả trong việc phân tách và xác định các phân tử nhỏ như axit amin, carbohydrate và axit béo. Tuy nhiên, sắc ký ái lực(tức là sắc ký trao đổi ion)hiệu quả hơn trong việc phân tách các đại phân tử dưới dạng axit nucleic và protein.
Loại cột nàosắc ký tách protein trên cơ sở trọng lượng phân tử?
Sắc ký lọc gel (GF)tách protein chỉ dựa trên kích thước phân tử. Sự phân tách được thực hiện bằng cách sử dụng ma trận xốp mà các phân tử, vì lý do cứng, có các mức độ tiếp cận khác nhau - tức là các phân tử nhỏ hơn có khả năng tiếp cận lớn hơn và các phân tử lớn hơn bị loại khỏi ma trận.
